TC-100培养基是一种专为昆虫细胞设计的合成培养基，广泛应用于草地贪夜蛾（SF9/SF21）细胞培养及杆状病毒生产。以下是其标准使用步骤：
一、培养基准备
储存条件
未开封的TC-100培养基需储存于2℃~8℃，有效期为9~12个月（具体以产品说明书为准）。
避免反复冻融，开封后建议分装密封保存。
复温与溶解
使用前需将培养基从冰箱取出，置于室温（20℃~25℃）或28℃水浴中缓慢复温，避免直接加热。
若培养基为干粉形式，需按说明书比例加入超纯水溶解，并使用0.22μm滤膜过滤除菌。
二、细胞复苏
冻存管处理
将含有细胞悬液的冻存管迅速置于37℃水浴中，1分钟内解冻。
解冻后用70%乙醇擦拭管壁消毒，转移至无菌操作台。
细胞接种
向冻存管中加入4mL预热至28℃的TC-100培养基（含10%胎牛血清，FBS），轻轻吹打混匀。
将细胞悬液转移至T25培养瓶中，补充培养基至总体积5mL，轻轻摇晃使细胞分布均匀。
培养条件
培养箱参数：温度28℃、湿度≥70%、CO₂浓度4.5%~5%（或根据需求调整）。
静置培养4~6小时后，换液以去除残留DMSO。
三、细胞传代
传代时机
当细胞密度达到80%~90%时进行传代，避免细胞过度生长导致状态下降。
消化处理
弃去旧培养基，用PBS清洗1次。
加入1~2mL 0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，37℃消化1~2分钟，显微镜下观察细胞变圆脱落。
终止消化与离心
加入等体积培养基终止消化，轻轻吹打使细胞分散。
1000rpm离心5分钟，弃上清，用新鲜培养基重悬细胞。
接种与稀释
按1:2~1:5比例传代，接种至新培养瓶中，补充培养基至5mL。
四、细胞冻存
冻存液配制
按90%FBS+10%DMSO比例现用现配，预冷至4℃。
细胞处理
消化收集细胞，离心后用冻存液重悬，调整细胞密度为1×10⁶~1×10⁷/mL。
分装至冻存管，每管1mL，标注细胞名称、代数及冻存日期。
程序降温
4℃放置30分钟→-20℃放置2小时→-80℃过夜→转移至液氮罐长期保存。
五、质量控制与注意事项
无菌操作
全程需在无菌操作台内进行，使用前需开启紫外灯照射30分钟。
培养基pH与渗透压
培养基pH应维持在6.0~6.4，渗透压320~355 mOsm/kg（具体以产品说明书为准）。
支原体检测
定期对细胞进行支原体检测，避免污染影响实验结果。
细胞状态监测
每日观察细胞形态与生长情况，及时处理异常（如污染、凋亡等）。
六、应用场景
杆状病毒表达系统：支持重组蛋白的高效表达。
昆虫细胞系培养：适用于草地贪夜蛾SF9、SF21等细胞系。
生物制药：用于病毒疫苗、抗体药物的生产与研发。
通过严格遵循上述步骤，可确保TC-100培养基在昆虫细胞培养中的性能，为后续实验提供可靠保障。
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